Formation théorique

La culture de lignées cellulaires : formation théorique et pratique

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  • Sessions : 
    • Les 15, 16 et 17 mai  2018 à Lyon
    • // De 9h00 à 17h00
  •  Durée : 3 journées – 21 heures
  • Pédagogie : Effectif : 8 Personnes
    Remise de support de cours
    La formation sera sanctionnée par une attestation de formation.
  • Référence : BMC-17
  • Frais pédagogiques – Partie théorique (uniquement sur 2 journées) : 900 € HT / Académiques : 675 € HT
  • Frais pédagogiques – Formation complète (théorie + pratique sur 3 journées) : 1500 € HT / Académiques : 1250 € HT. La pratique se déroule en groupe de 4 personnes.
  • Intervenant : Mme I. Grosjean & Dr. H. Valentin
  • Public concerné : Personnels scientifiques et techniques voulant s’initier à la culture de lignées cellulaires

PROGRAMME

JOURS 1 : COURS THÉORIQUES

La pratique de la culture de lignées cellulaires
– Introduction : présentation de la culture de lignées cellulaires.

– Notions historiques, définitions, matériels.

Présentation des lignées cellulaires continues
– Les cinq grandes catégories de lignées et cinq exemples d’utilisation
– La notion de passage : définition, courbe de croissance, numération
– Obtenir une lignée cellulaire : banque de référence, société commerciale, fabrication

Conservation des lignées cellulaires
– La congélation : paramètres, protocole, gestion des lots de congélation
– La décongélation : dangers liés à l’utilisation de l’azote, les protocoles de décongélation
– La traçabilité : les données associées, le nom des lignées cellulaires, l’organisation

Le problème des contaminations
– Exemples et le cas particulier des mycoplasmes
– La prévention des contaminations

Le matériel utilisé en culture cellulaire
– La notion d’évaluation du risque : les niveaux de confinement, le Poste de Sécurité Microbiologique (PSM), la gestion des déchets
– La manipulation : organisation, gestuelle, matériel.Conclusion
– Les Bonnes Pratiques en Culture Cellulaire (BPCC) : la notion de paramètres multiples

 

JOUR 2 : COURS + TD

Applications de l’utilisation de lignées cellulaires eucaryotes

La culture de lignées cellulaires : comment reproduire ses expériences

– Les différents types de lignées cellulaires
– Les milieux de culture cellulaire
– Les suppléments et additifs
– Gestion de l’ensemencement des lignées cellulaires en fonction des besoins
– Des solutions aux problèmes rencontrés
Aspects théoriques de la fabrication de lignées cellulaires modifiées génétiquement
– Choix du système d’expression
– Méthodes d’analyse
– Modalités d’expressionIllustrations in vitro de la manipulation de gènes dans des lignées cellulaires : avantages et inconvénients
– Aspects théoriques
– Méthodes de transfection
– Méthodes de transductionLes bonnes pratiques de laboratoire lors de l’utilisation de lignées cellulairesAvantages et inconvénients de l’utilisation de lignées cellulaires
Domaines d’application
BibliographieTD interactif de 3h sur la détection des mycoplasmes en luminescence et sur l’organisation et la gestion d’une collection de lignées cellulaires au sein d’une équipe de travail
– Test de détection des mycoplasmes en luminescence : avantages, inconvénients, réalisation d’un test et interprétation des résultats.
– Gestion d’une collection de lignées cellulaires : avantages, difficultés, présentation d’un exemple d’organisation simple et adaptée à une équipe de recherche académique (gestion de10 à 500 lignées cellulaires). Présentation de logiciels pour la gestion d’échantillons biologiques.

JOURS 3 : TP

– TP de culture de lignées cellulaires de 6h en petits groupes de 4 personnes pour mettre en pratique les notions acquises en cours
– Utilisation du matériel de base d’un laboratoire de culture cellulaire, acquisition des gestes et de l’organisation de travail, respect des mesures d’hygiène et sécurité.
– Observation au microscope ; Comptage des cellules et viabilité ; Passage d’une lignée adhérente ; Congélation ;  Décongélation ; Clonage cellulaire en dilution limite

OBJECTIFS

  • Maîtriser la culture des lignées cellulaires continues en suivant les règles de bonnes pratiques de culture et de sécurité

 

  • Comprendre l’importance de la conservation des lignées sur le long terme, de la traçabilité et du contrôle qualité

 

  • Appréhender la diversité des lignées existantes et connaitre les applications potentielles

 

  • Apprendre les règles de bonne pratique en laboratoire et maîtriser les risques liés à la contamination de cultures de lignés cellulaires afin de garantir la sécurité des personnels et la bonne conduite des expérimentation.

 

  • Analyser ce qu’il faut maintenir, améliorer et/ou changer dans sa pratique de la culture cellulaire

 

  • Savoir mettre en pratique les bonnes conditions de culture cellulaire avant de réaliser ses expériences

 

  • Savoir choisir la méthode de transfection ou de transduction pour sa propre lignée cellulaire

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