Formation théorique

Les bases de la culture de cellules primaires : méthodes, avantages et limites perspectives

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  • Sessions :
    • Le 20 juin 2019 à Paris
    • // De 9h00 à 17h00
  • Durée : 1 journée – 7 heures
  • Pédagogie : Effectif : 12 Personnes
    Remise de supports de cours. La formation sera sanctionnée par une attestation de formation. Exercices pratiques et études de cas.
  • Référence : BMC-16
  • Frais pédagogiques : 500 € HT / Académiques : 450 € HT
  • Intervenant : Dr. A-C. Fluckiger
  • Public concerné : Personnels scientifiques et techniques voulant s’initier à la culture de cellules primaires

PROGRAMME

INTRODUCTION

– Pourquoi la culture de cellules ?
– Bref historique et problématique ; utilisation de la cellule comme tube à essais
– Comparaison entre cellules primaires et lignées
– Présentation des avantages et des limites ; comparaison des exigences des cultures
– Rappel de biologie cellulaire
– Structure, métabolisme ; définitions des différentes phases de la vie d’une cellule : quiescence, prolifération/autorenouvellement, différenciation, sénescence, apoptose ; relations entre la cellule et son environnement
– Enoncé des principes de bases spécifiques à la culture des cellules primaires
– Recréer in vitro un environnement favorable au développement harmonieux de la cellule « normale »

METHODES DE LA CULTURE DE CELLULES PRIMAIRES

– Règles préliminaires nécessaires à toutes cultures
– Travail en condition d’asepsie
– Aspects règlementaires et éthiques
– Règles de sécurité liées à la manipulation de matériel biologique
– Documentation : « connaître sa cellule » et établir les critères de sélection (« cahier des charges »)
– Elimination des déchets
– Modes d’extraction
– Séparation des cellules dans les fluides biologiques
– Dissociation mécanique et enzymatique
– Migration à partir d’un explant
– Elimination des cellules mortes, enrichissement des cellules d’intérêt
– Conservation des cellules primaires
– Alternative à l’extraction : sources commerciales de cellules primaires
– Incubation et culture
– Types de culture : cultures en suspension, cultures adhérentes monocouches, cultures sur support 3D en suspension ou fixe) ;
– Milieu de culture et environnement : composition du milieu de culture, sérum et substituts, autres facteurs de croissances et additifs, conditions de culture (osmolarité, pH, température, gaz)
– Suivi des cultures : courbe de croissance, notion de passage, temps de doublement, inhibition de contact, critères de réussite et fin de culture (sénescence, différentiation, mort) ; importance de l’observation et de la standardisation
– Standardisation (QC, QA, déterminer l’état optimal pour l’utilisation, niveaux d’exigences selon les utilisations, GMP-BPL)
– La caractérisation des cellules en culture : nature et fonction préservées
– Expression des marqueurs de surface
– Expression de gènes
– Morphologie
– Fonction

UTILISATION DES CULTURES DE CELLULES PRIMAIRES

– Discussion des avantages et limites par rapport à l’utilisation d’autres systèmes comme les lignées continues ou l’animal
– Au laboratoire de recherche
– En industrie
– En clinique

PERSPECTIVES

– Le passage de la culture de cellules primaires à la lignée continue

– Lignées finies provenant de cellules « normales »
– Lignées transformées provenant de la culture de cellules cancéreuses (ex :HepaRG, Hela…)
– Lignées de cellules immortalisées (EBV)
– Cas particulier des cellules ES et iPSC

CULTURE DE CELLULES PRIMAIRES POUR LA RECONSTITUTION D’ORGANES

 

LA CULTURE DE CELLULES PRIMAIRES APPLIQUÉE À LA CLINIQUE

 

EXEMPLES SPECIFIQUES

– Des exemples choisis en fonction de l’intérêt spécifique de l’auditoire seront présentés en détails (à définir lors de l’inscription), comme par exemple :

– Modèle de reconstitution de l’ontogénèse et de la différenciation des lymphocytes B
– Activation des lymphocytes T
– Production de cellules nourricières à partir d’embryon de souris
– Utilisation des lignées finies en diagnostique virologique
– Culture de cellules musculaires

 

POUR EN SAVOIR PLUS (BIBLIOGRAPHIE, SITES WEB)

 

OBJECTIFS

  • Appréhender les concepts théoriques et les méthodes pratiques de base nécessaires à la réalisation de culture de cellules primaires

  • Comprendre l’ensemble des paramètres qui influencent la culture cellulaire afin de répondre de manière adéquate aux différents éléments qui peuvent influencer les rendements de croissance des cultures et les caractéristiques fonctionnelles des cellules primaires cultivées

  • Appréhender la diversité des modèles de culture primaire et en connaître les applications potentielles

  • Apprendre les règles de bonne pratique en laboratoire et maîtriser les risques liés à la contamination de cultures cellulaires afin de garantir la sécurité des personnels et la bonne conduite des expérimentations

  • Aborder les notions éthiques et réglementaires liées à la collecte et la manipulation des tissus d’origine humaine et animales

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