Formation théorique

Les bases de la cytométrie en Flux et du tri cellulaire

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  • Sessions :
    • Les 13 et 14 mai 2019 à Paris
    • // De 9h00 à 17h00
  •  Durée : 2 journées – 14 heures
  • Pédagogie : Effectif : 12 Personnes
    Remise de support de cours
    La formation sera sanctionnée par une attestation de formation.
  • Référence : BMC-02
  • Frais pédagogiques – Partie théorique (uniquement sur 2 journées) : 1000 € HT / Académiques : 800 € HT
  • Intervenant : Mme M. Andrieu & M. X. Ronot
  • Public concerné : Personnels scientifiques et techniques voulant s’initier à la cytométrie en flux et au tri cellulaire

PROGRAMME

JOURS 1 :

FLUORESCENCE ET FLUOROCHROMES :

Rappel sur la fluorescence

Les différents fluorochromes

Caractéristiques spectrales

Propriétés – Comment choisir les fluorochromes ?

PRINCIPE DE LA CYTOMÉTRIE EN FLUX :

Système fluidique et optique

Collection et traitement des signaux

REPRÉSENTATION DES DONNÉES :

Réglages

APPLICATION À L’ANALYSE DE LA PROLIFÉRATION CELLULAIRE :

Analyse monoparamétrique

Elimination des doublets

Détermination des effectifs dans les différentes phases du cycle cellulaire

ANALYSE BIPARAMÉTRIQUE :

Analyse de la synthèse d’ADN par incorporation de bromodésoxyuridine

Détection des cellules en mitose

Exemples d’applications.

Quelle méthode choisir ?

 

TRAVAUX D’APPLICATION INTERACTIFS

JOURS 2 :

TRI PAR CYTOMETRIE EN FLUX :

Principe du tri par déflection de gouttes

Les différents types de trieurs

Performance et limites du tri par déflexion

Tri cellulaire et bio-sécurité

Préparation de l’échantillon

Alternative ou pré-enrichissement par tri magnétique

Clonage

Exemple de tris

 

BONNES PRATIQUES CYTOMÉTRIQUES :

Préparation du cytomètre et contrôle qualité

Préparation de l’échantillon

Réglages des détecteurs

Réglages des compensations

Réalisation des témoins

Détermination du nombre de cellules à analyser

Règle d’un panel design multi-couleurs

 

DIFFERENTES APPLICATIONS EN CYTOMETRIE EN FLUX

Phénotypage et cytokines intracellulaires

Viabilité et mort cellulaire

Détection de l’apoptose

Flux calcique

Dosages multiplex de protéines type luminex.

 

TRAVAUX D’APPLICATION INTERACTIFS

 

REVUE DES NOUVEAUX OUTILS EN CYTOMETRIE DE FLUX

Cytomètrie à focalisation acoustique

Cytomètrie spectrale

Cytométrie de masse

L’analyse non supervisée (SPADE …)

OBJECTIFS

  • Comprendre les principes de la technologie : la fluorescence, les fluorochromes, le cytométre.

 

  • Maîtriser les bonnes pratiques de laboratoire en cytométrie

 

  • Appréhender le tri cellulaire

 

  • Présenter différentes applications de la cytométrie en flux

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