- Session :
- Les 11 et 12 mai 2020 à Paris
- De 9h00 à 17h00
- Durée : 2 journées – 14 heures
- Pédagogie : Effectif : 12 Personnes
Remise de support de cours
La formation sera sanctionnée par une attestation de formation. - Référence : BMC-02
- Frais pédagogiques – Partie théorique (uniquement sur 2 journées) : 1000 € HT / Académiques : 800 € HT
- Intervenant : Mme M. Andrieu & M. X. Ronot
- Public concerné : Personnels scientifiques et techniques voulant s’initier à la cytométrie en flux et au tri cellulaire
PROGRAMME
JOUR 1 :
FLUORESCENCE ET FLUOROCHROMES :
Rappel sur la fluorescence
Les différents fluorochromes
Caractéristiques spectrales
Propriétés – Comment choisir les fluorochromes ?
PRINCIPE DE LA CYTOMÉTRIE EN FLUX :
Système fluidique et optique
Collection et traitement des signaux
REPRÉSENTATION DES DONNÉES :
Réglages
APPLICATION À L’ANALYSE DE LA PROLIFÉRATION CELLULAIRE :
Analyse monoparamétrique
Elimination des doublets
Détermination des effectifs dans les différentes phases du cycle cellulaire
ANALYSE BIPARAMÉTRIQUE :
Analyse de la synthèse d’ADN par incorporation de bromodésoxyuridine
Détection des cellules en mitose
Exemples d’applications.
Quelle méthode choisir ?
TRAVAUX D’APPLICATION INTERACTIFS
JOUR 2 :
TRI PAR CYTOMETRIE EN FLUX :
Principe du tri par déflection de gouttes
Les différents types de trieurs
Performance et limites du tri par déflexion
Tri cellulaire et bio-sécurité
Préparation de l’échantillon
Alternative ou pré-enrichissement par tri magnétique
Clonage
Exemple de tris
BONNES PRATIQUES CYTOMÉTRIQUES :
Préparation du cytomètre et contrôle qualité
Préparation de l’échantillon
Réglages des détecteurs
Réglages des compensations
Réalisation des témoins
Détermination du nombre de cellules à analyser
Règle d’un panel design multi-couleurs
DIFFERENTES APPLICATIONS EN CYTOMETRIE EN FLUX
Phénotypage et cytokines intracellulaires
Viabilité et mort cellulaire
Détection de l’apoptose
Flux calcique
Dosages multiplex de protéines type luminex.
TRAVAUX D’APPLICATION INTERACTIFS
REVUE DES NOUVEAUX OUTILS EN CYTOMETRIE DE FLUX
Cytomètrie à focalisation acoustique
Cytomètrie spectrale
Cytométrie de masse
L’analyse non supervisée (SPADE …)
OBJECTIFS
- Comprendre les principes de la technologie : la fluorescence, les fluorochromes, le cytométre.
- Maîtriser les bonnes pratiques de laboratoire en cytométrie
- Appréhender le tri cellulaire
- Présenter différentes applications de la cytométrie en flux