• Session :
    • Le 9 novembre 2021 à Paris

// De 9h00 à 17h00

  • Pédagogie : Effectif : 12 Personnes
  • Durée : 1 journée – 7 heures

Cours théorique interactif projeté, questions et démarches déductives durant le cours, projection de mini films

Ateliers de travaux dirigés en binômes ou en groupe complet
Utilisation et manipulation des données brutes de dPCR au travers d’exercices de difficulté progressive

Le formateur interrogera les auditeurs à la fin de chaque chapitre et une évaluation sous forme d’exercices d’applications et d’un questionnaire seront réalisés en fin de formation
La formation sera sanctionnée par une attestation de formation

  • Les moyens pédagogiques techniques et d’encadrement : 

Un videoprojecteur // Une connexion wifi haut débit // Un paperboard // Un support de cours couleur

  • Accessibilité :

Formation accessible au public à mobilité réduite – Adaptation des moyens de la prestation aux personnes en situation de handicap

  • Référence : BMC-04
  • Frais pédagogiques :

530 € HT – Académiques : 480 € HT

Déjeuner offert

  • Formateur :

M. B. Ducos

  • Public concerné :

Personnels scientifiques et techniques débutants ou confirmés en PCR Digitale.

  • Prérequis :

Posséder un niveau en Biologie Moléculaire minimum (niveau BTS/IUT) et posséder des bases sur la la PCR et la Q-PCR

 


PROGRAMME

Analyser les différences entre qPCR et dPCR

Connaître tous les éléments nécessaires à l’accomplissement d’une expérience de PCR digitale

 > Comprendre les spécificités et les limites, afin de les utiliser au mieux dans le dessin expérimental de la PCR digitale adaptée à la question biologique posée

 – Connaître les stratégies de partitionnement, les équipements développés et leur disponibilité sur le marché

 – Connaître les compatibilités entre les chimies fluorescentes disponibles et les supports de partitionnement

 – Quelles matrices ou objets biologiques sont analysables par dPCR ?

 – Les oligonucléotides et leur importance en dPCR

Analyser le signal de fluorescence pour la détermination des partitions positives 

 > Comprendre l’acquisition du signal, sa normalisation et les compensations d’intensité de fluorescence dans le cas de l’utilisation de plusieurs fluorophores

Stratégies de multiplexage avec un ou plusieurs fluorophores

 > Multiplexage simple monochromatique

 > Multiplexage complexe polychromatique

 – Non compétitif

– Compétitif

Analyser l’expérience et quantifier les partitions positives

 > Interprétation qualitative de l’expérience

 > Comprendre et connaître la loi de Poisson, utilisée pour normaliser le résultat

 > Evaluer le niveau d’incertitude du résultat et adapter les paramètres de l’expérience en conséquence

 > Application à l’analyse en multiplexage

Définir la limite de sensibilité (ou détection) et la limite de quantification : LOD et LOQ

Connaître plusieurs exemples d’application de la PCR digitale en routine et en recherche

Adopter une vision globale de l’expérience où sont identifiés les points critiques et les nœuds décisionnels : réalisation ensemble d’un logigramme récapitulatif

Démarche qualité : les MIQE de la PCR digitale

OBJECTIFS/COMPÉTENCES

  • Comprendre les différences fondamentales entre les analyses génomiques quantitatives par PCR quantitative et digitale

  • Choisir et bâtir la meilleure stratégie, ou la plus adaptée, pour répondre à la question biologique posée, en fonction des avantages et faiblesses de chacune des deux approches

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Dernière modification le 11 septembre 2020 à 08:58